细胞免疫荧光实验原理及其步骤（细胞的免疫荧光实验）

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1细胞爬片免疫荧光实验有人做过吗?

1、我们实验室做过，小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安买的，实验效果不错. 细胞免疫荧光步骤： 细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗。【爬片的准备】 爬片：24*24盖玻片，刚好用于6孔板。

2、晶安生物细胞爬片常用的规格：圆形（φ24mm、φ20mm、φ14mm、φ8mm）。分别对应6孔板配套用细胞爬片、12孔板配套用细胞爬片、24孔板配套用细胞爬片、48孔板配套用细胞爬片。师姐用的晶安生物12孔细胞爬片，实验结果较为理想。

3、细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%Triton X 100通透10分钟，PBS洗三遍。4， 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。

4、免疫荧光细胞爬片常用的规格有。圆形直径24，20，14，8毫米的。分别对应六孔板配套细胞爬片，12孔板配套细胞爬片，24孔板套用细胞爬片，48孔板配套用细胞爬片，常用的有12孔爬片，实验效果较为理想。

2请教:细胞免疫荧光

1、细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%Triton X 100通透10分钟，PBS洗三遍。4， 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。

2、我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。（4）封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey血清。（5）其余步骤同一般免疫荧光单标操作。

3、不是所有的癌细胞都能够悬浮培养吧，比如3T3细胞＼前列腺癌（Prostate Cancer）细胞＼人肝癌细胞Hep-G2等都是贴壁生长的！2，贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特点。

4、很可能做双染的，感觉常用的只有绿色和红色，再加上染核的蓝色。，但是要注意后续染色的时候二抗的荧光不要跟质粒携带的荧光的颜色一样。

5、免疫荧光是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原。

6、采用两种酶两步法分离培养人睾丸精原干细胞。

3细胞免疫荧光,求助

1、、配制荧光标记二抗：Ab50598 Goat anti-rabbit IgG（H&L） TRITC，用PBS或FBS配制。浓度1：200 1加入二抗，室温孵育1小时（避光）。1 冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床。1DAPI染核，每皿1滴，完全覆盖住细胞即可。

2、细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%Triton X 100通透10分钟，PBS洗三遍。4， 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。

3、要看阳性对照和阴性对照，阴性对照没有荧光，阳性对照有荧光，重复一次结果稳定的话就可以说是阳性了。样品的稀释度要看蛋白的表达量，用你们实验室的标准protocol先做一遍，结果不好再优化条件。

4、首先你应该确认老鼠是不是转基因老鼠，会不会有自发荧光的产生。其次，二抗就是荧光染料，只要加了二抗，就会有荧光的产生，所以需要在加完二抗后用PBS洗5次，充分将多余二抗洗掉，避免在拍片时产生躁点影响实验结果。

4免疫荧光标记技术是什么?

1、免疫荧光是一种现代化的检测方法，是通过荧光技术来检测某个物质中是否含有特定的抗原或抗体。通常使用荧光标记的抗体与待检测样品中的特定抗原结合，在荧光显微镜下观察样品的荧光强度，通过荧光信号的强弱判断样品是否含有待检测的抗体或抗原。该方法具有灵敏度高、准确性高、操作简便、效果明显等优点。

2、免疫荧光标记技术始创于20世纪40年 代初，1942年Coons等首次报道用异氰酸荧光素标记抗体，检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原。当时由于异氰酸荧光素标记物的性能较差，未能推广使用。直至1958年Riggs等合成了性能较为优良的异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）。

3、免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体（或抗原）检测组织、细胞或血清 中的相应抗原（或抗体）的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点，因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同，可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。

4、免疫荧光染色是一种利用免疫学原理进行染色标记的技术。它结合了免疫学方法和荧光染色技术，通过特异性的抗体与待检测物质结合，利用荧光染料标记这些抗体，从而在显微镜下观察到相应的抗原分布和表达情况。免疫荧光染色的应用领域 免疫荧光染色广泛应用于病理学诊断和免疫学研究中。

5、免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。

6、免疫三大标记技术是： 免疫荧光技术：免疫荧光技术是一种通过使用荧光染料来标记和检测生物分子（通常是抗体或抗原）的方法。这项技术常常用于检测细胞内和组织内特定蛋白质的位置和分布。在这个方法中，抗体通常会与荧光染料结合，然后用于与样本中的目标蛋白结合。

5免疫荧光怎么做

让我们通过一个激光共聚焦显微镜下的荧光图像来实践。首先，打开图像并选择单通道（Image-Color-Split Channels），如果是RGB格式，记得进行通道分离。对于高精度的16-bit或32-bit图像，可以直接进行阈值调整，但要保留尽可能多的信号信息，避免损失。

优化缓冲液和封闭剂 尽管很多抗原在常见的Buffer如PBS中可以很好的被染色，但是对于某些目的抗原，更换一下含有不同离子的缓冲液，比如钙、镁、钾等，可以带来很大程度上的改善。Rockland可提供优化过的IHC用封闭缓冲液，同样适用于荧光染色实验。

组织免疫荧光操作有两大致用方式：冷冻切片与石蜡包埋切片。两种方法各有其优势与局限性。针对石蜡包埋切片，操作时需进行抗原修复步骤，通常在柠檬酸盐缓冲液中加热30分钟，此举旨在有效去除醛类固定剂导致的蛋白间交联，确保石蜡切片中的抗原位点充分暴露，进而显著提升免疫荧光染色效果。

细胞培养，方法见国家药典。但是细胞培养耗时更长。

细胞爬片免疫荧光步骤：晶安生物细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。

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